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稀释水的质量对BOD5测定结果的准确性具有重要意义。因此，要求稀释水空白5天的耗氧量必须小于0.2mg/L，最好小于0.1mg/L，接种后的稀释水5日耗氧量应在0.3～1.0mg/L之间。 保证稀释水水质的关键是控制有机物的最低含量和抑制微生物繁殖的物质的最低含量，因此，最好用蒸馏水作为稀释水，不宜用离子交换树脂制成的纯水作为稀释水，因为去离子水往往含有从树脂中分离出来的有机物。如果制备蒸馏水的自来水中含有一些挥发性有机化合物，为防止它们残留在蒸馏水中，蒸馏前应进行预处理以去除有机化合物。在金属蒸馏器制备的蒸馏水中，应注意检查其中金属离子的含量，以免发生抑制微生物的繁殖和代谢的情况，影响BOD5测定结果的准确性。 如果使用的稀释水因有机物不符合要求，可加入适量曝气池接种液后，在室温或20℃条件下保存一定时间，即可消除。接种量以5d耗氧量0.1mg/L左右为原则。为了防止藻类繁殖，必须在暗室中进行储存。如果储存后的稀释水中有沉淀物，只能使用上清液，过滤去除沉淀物。 为保证稀释水中的溶解氧接近饱和，必要时可用真空泵或水射器吸入净化空气，也可用微型空压机注入净化空气， 并且可以用氧气瓶引入纯氧，然后将充氧的稀释水放入20℃的培养箱中一定时间，让溶解氧达到平衡。冬季放置在较低室温的稀释水可能含有过多的溶解氧，夏季高温季节则相反。因此，当室温与20℃有明显差异时，必须在培养箱中放置一段稳定的时间，使其与培养环境中的氧分压平衡。
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