生化需氧量是指微生物在特定条件下分解水中某些可氧化物质，特别是有机物的化学过程所消耗的溶解氧量。BOD5是指在20℃培养5天前后溶解氧的测量值。两者之差为BOD5值，以氧的mg/L表示，测试范围为2mg/l～6000mg/l。

——仪器

恒温培养箱

20ml系口玻璃瓶

1000ml量筒

玻璃搅棒：棒的长度长于普通玻璃棒，在棒的底端固定一个直径比量筒底小，并带有几个小孔的硬橡胶板。

溶解氧瓶：250ml，带有磨口玻璃塞并且有供水封用的钟形口。

移液管：供分取水样和添加稀释水用。

——试剂

磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾，21.75g磷酸氢二钾，33.4g七水合磷酸氢二钠和1.7g氯化铵溶于水中，稀释至1000ml，此溶液的pH值应为7.2

硫酸镁溶液：将22.5g七水合硫酸镁溶于水中，稀释至1000ml。

氯化钙溶液：将27.5无水氯化钙溶于水，稀释1000mL

氯化铁溶液：将0.25g 六水合氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水中稀释至1000ml

盐酸溶液：将40ml(=1.18mg/l)盐酸溶于水，稀释至1000ml

氢氧化钠溶液：将20g氢氧化钠溶于水中，稀释至1000ml。

亚硫酸钠溶液：将1.575g亚硫酸溶于水中，稀释至1000ml。

葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖和谷氨酸在103℃干燥1h后，各称取150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶内稀释至标线，混合均匀。此标准溶液临用前配制。

稀释水：在5-20 L玻璃瓶内装入一定量水。控制水温在20℃左右，然后用无油空气压缩机，将吸入的空气经活性碳吸附管及洗涤管后，导入稀释水内曝气2.8h。使稀释水中的溶解氧接近饱和。放置于20℃培养箱中放置数小时。使水中的溶解氧达到8mg/l左右，临用前每升加入氯化钙、氯化铁溶液。磷酸盐缓冲液1ml，并混合均匀的PH值为7.2。其BOD5应为小于0.2mg/l.

接种液：城市污水，在室温下放置一昼夜，取上清液使用。

接种稀释水：分取适量接种液，加入稀释中、混匀。每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1～10ml.接种液配置后立即使用。

——操作步骤

水样的预处理

调节pH值

保持20℃的水样温度。

水样测定：按照选定的稀释比例，用虹吸沿筒壁先引入部分稀释水于1000ml中。加入需要量的均匀水样。再加入稀释水至800ml，搅拌时防止出现气泡。另外取两个溶解氧瓶用虹吸法装满稀释水作为空白试验，测定5d前后的溶解氧。

——计算

不经稀释直接培养的水样：

BOD5(mg/L)=C1- C2

式中： —水样在培养前的溶解氧浓度(mg/L);

—水样经5d培养后，剩余溶解氧浓度(mg/L)。

——经过稀释后的水样计算：

BOD5=[(C1-C2)-(B1-B2)f1]/f2

式中：B1—稀释水在培养前的溶解氧;

B2—稀释在培养后的溶解氧;

f1—稀释水在培养液中所占的比例;

f2—水样在培养液中所占的比例。