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叶绿素含量测定的原理及方法

时间:2022-05-28 16:42:16   访客:997

一、实验目的

1.了解植物组织中叶绿素的分布和性质。

2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。

二、实验原理

叶绿素广泛存在于水果、蔬菜等绿色植物组织中,与植物细胞中的蛋白质结合形成叶绿体。当植物细胞死亡时,叶绿素就会释放出来。游离叶绿素非常不稳定,对光和热敏感。在酸性条件下,叶绿素形成绿褐色脱镁叶绿素,在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿素酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中的叶绿素有两种:叶绿素a和b,均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

叶绿素含量的测定方法有很多,包括:1.原子吸收光谱法:通过测定镁的含量间接计算出叶绿素的含量。2.分光光度法:用分光光度计测量叶绿素提取物在较大吸收波长处的吸光度值,然后可以利用朗伯-比尔定律计算提取物中各色素的含量。

叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有较大吸收,两条吸收曲线在652nm处相交。因此,分别测定了提取物在645nm、663nm和652nm波长处的吸光度值,可根据经验公式分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。

三、仪器、原料和试剂

仪器:分光光度计、电子顶载天平(灵敏度0.01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦纸、滴管。

原料:新鲜(或干燥)植物叶子

试剂:1.96%乙醇(或80%丙酮)2.石英砂3.碳酸钙粉。

四、操作步骤

取新鲜植物叶子(或其他绿色组织)或干燥材料,擦去组织表面污垢,并去除中脉剪碎。称取2g新鲜剪碎的样品,放入研钵中,加入少量石英砂、碳酸钙粉和3mL 95%乙醇,研磨成均质浆液,加入10mL乙醇,继续研磨至组织变白。静置3到5min。 取1张滤纸放入漏斗中,用乙醇润湿,将提取液沿玻璃棒倒入漏斗中,滤液倒入100mL棕色容量瓶中;用少量乙醇冲洗研钵、研棒和残渣数次,最后与残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直到滤纸和残渣没有绿色为止。最后,用乙醇定容至 100 mL,摇匀。取叶绿体色素提取物,在665nm、645nm和652nm波长处测定吸光度,以95%乙醇作为空白对照。

五、计算

根据实验原理中提供的经验公式,分别计算出植物材料中叶绿素a、b和总叶绿素的含量。


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