一、实验目的

1.了解植物组织中叶绿素的分布和性质。

2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。

二、实验原理

叶绿素广泛存在于水果、蔬菜等绿色植物组织中，与植物细胞中的蛋白质结合形成叶绿体。当植物细胞死亡时，叶绿素就会释放出来。游离叶绿素非常不稳定，对光和热敏感。在酸性条件下，叶绿素形成绿褐色脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿素酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中的叶绿素有两种：叶绿素a和b，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

叶绿素含量的测定方法有很多，包括：1.原子吸收光谱法：通过测定镁的含量间接计算出叶绿素的含量。2.分光光度法：用分光光度计测量叶绿素提取物在较大吸收波长处的吸光度值，然后可以利用朗伯-比尔定律计算提取物中各色素的含量。

叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有较大吸收，两条吸收曲线在652nm处相交。因此，分别测定了提取物在645nm、663nm和652nm波长处的吸光度值，可根据经验公式分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。

三、仪器、原料和试剂

仪器：分光光度计、电子顶载天平（灵敏度0.01g）、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦纸、滴管。

原料：新鲜（或干燥）植物叶子

试剂：1.96%乙醇（或80%丙酮）2.石英砂3.碳酸钙粉。

四、操作步骤

取新鲜植物叶子（或其他绿色组织）或干燥材料，擦去组织表面污垢，并去除中脉剪碎。称取2g新鲜剪碎的样品，放入研钵中，加入少量石英砂、碳酸钙粉和3mL 95%乙醇，研磨成均质浆液，加入10mL乙醇，继续研磨至组织变白。静置3到5min。 取1张滤纸放入漏斗中，用乙醇润湿，将提取液沿玻璃棒倒入漏斗中，滤液倒入100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒和残渣数次，最后与残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直到滤纸和残渣没有绿色为止。最后，用乙醇定容至 100 mL，摇匀。取叶绿体色素提取物，在665nm、645nm和652nm波长处测定吸光度，以95%乙醇作为空白对照。

五、计算

根据实验原理中提供的经验公式，分别计算出植物材料中叶绿素a、b和总叶绿素的含量。